ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402689

概要

PDIA4はERp72をコードしている。ERp72は小胞体（ER）に局在するプロテインジスルフィドイソメラーゼ（PDI）ファミリーの一員で、チオール–ジスルフィド交換反応を触媒することで、分泌タンパク質や膜タンパク質の酸化的フォールディングおよび品質管理を支える。ERp72は、シャペロンや他のPDIとともにERのプロテオスタシス・ネットワーク内で機能し、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル、ER関連分解（ERAD）、およびERストレス条件下でのレドックス恒常性の維持に寄与する。クライアントタンパク質の成熟過程を調整し、プロテオトキシックなストレスを抑えることで、PDIA4は分泌、抗原プロセシング、タンパク質フォールディングの乱れに対する細胞適応に関連する経路へ影響を及ぼす。ERでの折りたたみ能の破綻や慢性的なERストレスは、がん生物学、代謝疾患、神経変性過程に関与するとされており、PDIA4はストレスシグナルやプロテオーム品質管理の機構研究における有用なノードとなる。

ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDIA4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDIA4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDIA4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERp72タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ERp72シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDIA4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ERp72の機能に不可欠なPDIA4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDIA4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびERp72 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDIA4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ERp72 HDRプラスミド（h）および ERp72 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDIA4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDIA4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。