ERM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401161-ACT

O ETV5 humano codifica o fator de transcrição ERM, da família ETS, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que integra sinais extracelulares para controlar programas gênicos que governam proliferação, diferenciação e migração celular. O ERM atua a jusante da sinalização por receptores tirosina-quinase, incluindo as vias FGF–MAPK/ERK, e contribui para a especificação de linhagens e o remodelamento tecidual por meio do controle transcricional de estados de desenvolvimento e semelhantes aos de células-tronco. A atividade desregulada de ETV5/ERM tem sido associada a alterações na diferenciação epitelial e endócrina e frequentemente está ligada a redes transcricionais oncogênicas em múltiplos contextos tumorais. Essas propriedades tornam o ETV5 um nó útil para estudar a circuitaria transcricional dirigida por ETS, o uso de enhancers dependente de sinal e a regulação gênica específica de contexto em modelos de células humanas.

ERM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ETV5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ERM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ETV5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ETV5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ERM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ETV5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ERM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ERM em células tumorais com expressão de ETV5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.