Plásmido CRISPR de Activación (h) ERK 5: sc-400891-ACT

MAPK7 codifica ERK5, una quinasa MAP atípica que integra señales de factores de crecimiento, citocinas y estrés celular para regular programas transcripcionales que controlan la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. ERK5 se activa aguas abajo de MEK5 y modula dianas que incluyen factores de transcripción de la familia MEF2, conectando la señalización MAPK con la función endotelial, la remodelación del citoesqueleto y las respuestas al estrés mecánico u oxidativo. A través de su actividad quinasa y de su dominio C-terminal único de activación transcripcional, ERK5 influye en la progresión del ciclo celular y en la expresión génica asociada a la migración. La desregulación de la señalización MAPK7/ERK5 se ha asociado con alteraciones en la señalización angiogénica y en el cableado de vías oncogénicas en múltiples contextos tumorales, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del crosstalk entre redes MAPK.

ERK 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPK7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ERK 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPK7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPK7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ERK 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPK7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ERK 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ERK 5 en células tumorales con expresión de MAPK7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.