Particules Lentivirales d'Activation (m) Erg: sc-420226-LAC

Erg code un facteur de transcription de la famille ETS qui se lie aux motifs GGAA/T afin de coordonner des programmes d’expression génique contrôlant la biologie endothéliale, le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, ainsi que la différenciation spécifique de lignée. Chez la souris, Erg intègre des signaux issus des voies du développement et de la vascularisation pour réguler la progression du cycle cellulaire, la survie et l’état de la chromatine via le contrôle transcriptionnel de cibles associées à l’angiogenèse, à l’inflammation et aux caractéristiques de « stemness ». Une activité d’ERG dérégulée est liée à des altérations de l’hématopoïèse et à un remodelage vasculaire aberrant, et elle est largement étudiée dans le contexte du remaniement des réseaux transcriptionnels lors de la leucémogenèse et du dysfonctionnement endothélial. Ces fonctions font d’Erg un nœud utile pour explorer les circuits de régulation génique, l’utilisation des enhancers et les décisions de destinée cellulaire dans des modèles murins pertinents et des systèmes de cellules primaires.

Les particules d'activation lentivirales Erg (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Erg dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Erg (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Erg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Erg. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Erg ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.