Plásmido CRISPR de Activación (m) Erg: sc-420226-ACT

Mouse Erg codifica un factor de transcripción de la familia ETS que se une a motivos centrales GGAA/T para regular programas génicos que controlan la especificación endotelial, la estabilidad vascular y el mantenimiento de células madre y progenitoras hematopoyéticas. Erg integra señales de vías angiogénicas y sensibles a citocinas, incluidas redes transcripcionales endoteliales impulsadas por VEGF y la regulación del output transcripcional vinculada a MAPK/PI3K. La actividad desregulada de ERG se estudia ampliamente en circuitos transcripcionales oncogénicos, en particular en neoplasias hematológicas y en contextos de fusiones impulsadas por ETS, donde la expresión alterada de genes diana afecta la proliferación, la diferenciación y la identidad celular. En sistemas murinos, Erg se utiliza con frecuencia para modelar el compromiso de linaje, la biología vascular y la dependencia de factores de transcripción en el desarrollo normal y en estados celulares relevantes para la enfermedad.

Erg El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Erg sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Erg El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Erg en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Erg, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Erg. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Erg y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Erg en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Erg en células tumorales con expresión de Erg silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.