eRF3a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404748

Descripción general

GSPT1 codifica el factor de liberación eucariota 3a (eRF3a), una GTPasa asociada al ribosoma que se asocia con eRF1 para impulsar la terminación de la traducción y favorecer el reciclaje del ribosoma tras el reconocimiento del codón de parada. Mediante una hidrólisis de GTP regulada e interacciones con la proteína de unión a poli(A) y otros factores de traducción, eRF3a ayuda a coordinar la vigilancia del ARNm, la proteostasis y la fidelidad de la síntesis proteica. Las alteraciones en el control de la terminación de la traducción y en las vías de control de calidad del ARN se han relacionado con la desregulación de programas de crecimiento celular y respuestas al estrés, lo que convierte a GSPT1 en un nodo útil para estudiar cómo el control translacional se integra con redes de señalización y homeostasis. En investigación biomédica, la perturbación de eRF3a puede aprovecharse para investigar mecanismos de lectura a través de codones de parada (stop-codon readthrough), el acoplamiento con la degradación mediada por codones sin sentido (NMD) y las vulnerabilidades que surgen por un mantenimiento deficiente del proteoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO eRF3a (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GSPT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GSPT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GSPT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eRF3a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GSPT1 para la investigación de la señalización de eRF3a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GSPT1 críticos para la función de eRF3a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GSPT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido eRF3a CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eRF3a CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GSPT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eRF3a (h) y el plásmido HDR eRF3a (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GSPT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GSPT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.