eRF3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404748

Übersicht

GSPT1 kodiert den eukaryotischen Freisetzungsfaktor 3a (eRF3a), eine ribosomenassoziierte GTPase, die mit eRF1 zusammenwirkt, um die Translation zu terminieren und nach der Erkennung eines Stoppcodons das Recycling der Ribosomen zu fördern. Durch regulierte GTP-Hydrolyse sowie Interaktionen mit dem Poly(A)-Bindungsprotein und weiteren Translationsfaktoren trägt eRF3a dazu bei, die mRNA-Überwachung, die Proteostase und die Genauigkeit der Proteinsynthese zu koordinieren. Eine veränderte Kontrolle der Translationstermination und der RNA-Qualitätskontrollwege wurde mit dysregulierten Programmen des Zellwachstums und Stressantworten in Verbindung gebracht, was GSPT1 zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um zu untersuchen, wie translationale Kontrolle mit Signal- und Homöostasenetzwerken zusammenspielt. In der biomedizinischen Forschung kann eine gezielte Beeinflussung von eRF3a genutzt werden, um Mechanismen des Stopcodon-Readthrough, die Kopplung an den nonsense-mediated decay (NMD) sowie Schwachstellen zu analysieren, die aus einer beeinträchtigten Aufrechterhaltung des Proteoms entstehen.

Das eRF3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GSPT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GSPT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GSPT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eRF3a-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GSPT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eRF3a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GSPT1-Exone abzielen, die für die eRF3a-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GSPT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom eRF3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom eRF3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GSPT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eRF3a HDR-Plasmid (h) und eRF3a HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GSPT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GSPT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.