Plasmide CRISPR d'Activation (h) ERF: sc-403877-ACT

ERF (facteur répresseur ETS2) est un répresseur transcriptionnel humain de la famille ETS qui se lie aux motifs ETS afin de moduler des programmes géniques contrôlant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et l’apoptose. L’activité d’ERF est régulée par une phosphorylation dépendante de MAPK/ERK, qui influence sa localisation subcellulaire et son activité transcriptionnelle, reliant ainsi les signaux extracellulaires de croissance au contrôle transcriptionnel nucléaire. En limitant la transcription dépendante des ETS, ERF contribue à la régulation homéostatique de la prolifération et de la spécification des lignages, des processus fréquemment perturbés dans des contextes de signalisation oncogénique. La dérégulation des réseaux dépendants d’ERF a été associée à une réactivité altérée aux facteurs de croissance et à des états transcriptionnels aberrants pertinents pour la biologie du cancer et les troubles du développement.

ERF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ERF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ERF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ERF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ERF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ERF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ERF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ERF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ERF dans les cellules tumorales présentant une expression de ERF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.