ERCC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400630-ACT

ERCC1は構造特異的エンドヌクレアーゼをコードしており、XPF（ERCC4）と機能的なヘテロ二量体を形成して、ヌクレオチド除去修復（NER）における切開反応を担うとともに、ファンコニ貧血経路と協調してDNAの鎖間架橋を解消します。これらの作用を通じて、ERCC1はゲノム安定性の維持に寄与し、複製フォークの回復を支え、紫外線や遺伝毒性物質によって生じるDNA損傷の蓄積を抑制します。ERCC1の機能や発現の変化は、DNA修復能の低下、変異負荷の増大、DNA損傷ストレスに対する細胞の過敏性と関連します。そのため、ERCC1依存的な修復過程は、発がん、加齢に伴うゲノム維持、ならびに実験系におけるDNA損傷への抵抗性／感受性の機序といった文脈で広く研究されています。

ERCC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERCC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERCC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERCC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERCC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERCC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERCC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERCC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERCC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERCC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。