ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400146-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ErbB3/HER3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ErbB3/HER3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ERBB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ErbB3/HER3: sc-7390
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400146-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400146-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERBB3 kodiert ErbB3/HER3, ein Mitglied der ERBB-Rezeptor-Tyrosinkinase-Familie mit einer beeinträchtigten intrinsischen Kinasedomäne, das seine Funktion überwiegend durch Heterodimerisierung ausübt, am häufigsten mit ERBB2/HER2. Die ligandenabhängige Aktivierung durch Neureguline fördert die Bildung von Rezeptorkomplexen und Phosphorylierungsereignisse, die PI3K–AKT- und MAPK-Signale weiterleiten und so Proliferation, Überleben, Differenzierung sowie Entscheidungen zum epithelialen Zellschicksal koordinieren. ERBB3 ist häufig in onkogene Signalnetzwerke eingebunden, in denen veränderte Expression oder eine Umverdrahtung von Signalwegen Verschiebungen der Wachstumsfaktorabhängigkeit und adaptive Signalgebung unterstützen können. Aufgrund seiner zentralen Rolle im Rezeptor-Cross-talk wird ERBB3 oft als Knotenpunkt genutzt, um Signalrobustheit, Feedback-Regulation und Mechanismen der Arzneimittelresistenz auf Signalwegebene zu untersuchen.
ErbB3/HER3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ERBB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ERBB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ERBB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ERBB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.