Plasmide CRISPR d'Activation (m) ErbB2/HER2: sc-420218-ACT

Le gène murin **Erbb2** code la tyrosine kinase réceptrice **ErbB2/HER2**, membre de la famille **EGFR/ErbB**, qui agit comme partenaire privilégié d’hétérodimérisation afin d’amplifier la signalisation induite par les facteurs de croissance. Lors de son activation, ErbB2 mobilise les voies **MAPK/ERK** et **PI3K–AKT** pour réguler la prolifération, la survie, le métabolisme et la différenciation, avec des effets supplémentaires sur l’adhérence et la motilité cellulaires. Dans l’épithélium mammaire et d’autres tissus, la signalisation d’ErbB2 contribue à l’organisation du développement et à l’homéostasie tissulaire, et sa dérégulation est largement utilisée comme modèle de signalisation oncogénique et d’altération du trafic des récepteurs. Comme ErbB2 ne possède pas de ligand soluble connu, son activité est souvent étudiée à travers les variations de niveaux d’expression, la composition des dimères et les réseaux de phosphorylation en aval.

ErbB2/HER2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Erbb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ErbB2/HER2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Erbb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Erbb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ErbB2/HER2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Erbb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ErbB2/HER2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ErbB2/HER2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Erbb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.