EPX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402513

Übersicht

EPX (Eosinophilen-Peroxidase) kodiert ein hämhaltiges Granulaenzym, das überwiegend in Eosinophilen exprimiert wird. Dort katalysiert es halid- und thiocyanatabhängige oxidative Reaktionen, die zur antimikrobiellen Aktivität beitragen und entzündliche Mikroumgebungen modulieren. Durch die Erzeugung reaktiver Oxidantien greift EPX in Effektormechanismen der angeborenen Immunabwehr, in Redox-Signalwege sowie in Prozesse des Umbaus der extrazellulären Matrix ein, die die Rekrutierung von Leukozyten und Gewebeschädigungsreaktionen beeinflussen. Eine veränderte EPX-Aktivität und die Degranulation von Eosinophilen wurden mit eosinophiler Entzündung bei Erkrankungen der Atemwege und des Gastrointestinaltrakts sowie mit Überempfindlichkeitsreaktionen in Verbindung gebracht. EPX wird daher häufig als molekularer Indikator für die Aktivierung von Eosinophilen und als funktioneller Knotenpunkt zur Untersuchung oxidativ stressbedingter Schäden und der Immunregulation verwendet.

Das EPX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EPX-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EPX-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EPX nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EPX-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EPX-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EPX-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EPX-Exone abzielen, die für die EPX-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EPX-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EPX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EPX CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EPX-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EPX HDR-Plasmid (h) und EPX HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EPX-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EPX-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.