Epidermis-type 12-LO Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419088

Panoramica

Alox12b codifica la 12-lipossigenasi di tipo epidermico (12-LO), una diossigenasi dipendente dal ferro non-eme che ossida acidi grassi polinsaturi esterificati generando intermedi lipidici idroperossidi. Nell’epidermide murina, ALOX12B opera all’interno della via delle lipossigenasi che sostiene l’elaborazione degli acilceramidi e la formazione della barriera lipidica dello strato corneo, coordinando la differenziazione terminale dei cheratinociti e la cornificazione. Un’alterata attività della 12-LO influisce sull’omeostasi dei lipidi epidermici, sulla segnalazione ossidativa lipidica e sull’integrità della barriera, processi comunemente studiati in modelli di fenotipi tipo ittiosi, dermatite e stress infiammatorio cutaneo. Di conseguenza, Alox12b rappresenta un utile punto di partenza per analizzare il contributo del metabolismo lipidico alla funzione di barriera epiteliale e alla segnalazione immunitaria cutanea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Epidermis-type 12-LO (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Alox12b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Alox12b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Alox12b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Epidermis-type 12-LO.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Alox12b per lo studio della segnalazione di Epidermis-type 12-LO, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Alox12b critici per la funzione di Epidermis-type 12-LO
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Alox12b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Epidermis-type 12-LO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Alox12b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Epidermis-type 12-LO Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Epidermis-type 12-LO (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Alox12b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Alox12b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.