EPHX2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402095-NIC

EPHX2 kodiert die lösliche Epoxidhydrolase (sEH), ein bifunktionelles Enzym, das Lipid‑Epoxide aus mehrfach ungesättigten Fettsäuren in die entsprechenden Diole umwandelt und dadurch das Gleichgewicht von Epoxyeicosatriensäuren und verwandten Epoxy‑Fettsäuren moduliert. Über diesen Schritt der Epoxid‑Hydrolyse beeinflusst EPHX2 Eicosanoid‑ und Oxylipin‑Signalwege, die den Gefäßtonus, inflammatorische Signalgebung, Reaktionen auf oxidativen Stress und den zellulären Stoffwechsel regulieren. Eine veränderte EPHX2‑Aktivität und veränderte Oxylipin‑Profile wurden mit kardiometabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Hypertonie, Insulinresistenz und atheroskleroseassoziierte Prozesse, sowie mit neuroinflammatorischer Signalgebung und schmerzbezogenen Signalwegen. In der biomedizinischen Forschung wird EPHX2 häufig im Kontext der Biologie von Lipidmediatoren, der Funktion von Endothel‑ und Immunzellen sowie von Stress‑Antwort‑Signalwegen untersucht, die metabolische Inputs mit inflammatorischen Outputs koppeln.

sEH Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHX2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHX2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHX2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHX2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.