Plásmido Doble Nickase (h) ephrin-A3: sc-402771-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ephrin-A3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ephrin-A3 (h) y el plásmido de doble nickasa ephrin-A3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EFNA3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ephrin-A3 Anticuerpo (D-8): sc-393727
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ephrin-A3 | sc-402771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ephrin-A3 | sc-402771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EFNA3 codifica la efrina-A3, un ligando anclado a glicosilfosfatidilinositol para las tirosina quinasas receptoras Eph, que media señales dependientes del contacto para coordinar el posicionamiento celular, la formación de límites y la guía axonal. Las interacciones efrina-A3–Eph regulan la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de adhesión y la señalización bidireccional que influye en la migración y el patrón tisular mediante vías vinculadas a las GTPasas de la familia Rho y a la señalización MAPK/ERK. En biología humana, la alteración de la señalización efrina/Eph se ha asociado con angiogénesis desregulada, comportamiento invasivo y comunicación con el microambiente en múltiples contextos de enfermedad, incluido el cáncer. Por ello, EFNA3 se estudia en mecanismos de comunicación célula–célula, programas del desarrollo y procesos de remodelación relevantes para la progresión tumoral y la biología vascular.
ephrin-A3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EFNA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EFNA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EFNA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EFNA3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.