EphB6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420202

Descripción general

Ephb6 codifica EphB6, un miembro de la familia de receptores tirosina cinasa Eph que participa en señalización dependiente del contacto con ligandos efirina‑B para regular la comunicación célula‑célula. Aunque EphB6 presenta una actividad cinasa reducida en comparación con otros receptores EphB, modula el agrupamiento de receptores y las vías aguas abajo que controlan la remodelación del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración direccional, con vínculos con la señalización de GTPasas de la familia Rho y con el crosstalk de las redes MAPK/PI3K. En sistemas murinos, EphB6 se estudia en procesos como la activación de células inmunitarias y la organización tisular, donde los gradientes efirina–Eph determinan el posicionamiento celular. La desregulación de la señalización asociada a EphB6 se ha investigado en contextos de comportamiento epitelial alterado y fenotipos relacionados con tumores, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de control del crecimiento e interacciones con el microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EphB6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ephb6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ephb6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ephb6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EphB6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ephb6 para la investigación de la señalización de EphB6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ephb6 críticos para la función de EphB6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ephb6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EphB6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EphB6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ephb6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EphB6 (m) y el plásmido HDR EphB6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ephb6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ephb6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.