Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
EphA4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400729-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphA4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphA4 Double-Nickase-Plasmid (h) und EphA4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPHA4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EphA4: sc-365503
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphA4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400729-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400729-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA4 kodiert EphA4, eine Rezeptor-Tyrosinkinase aus der Eph/Ephrin-Familie, die eine kontaktabhängige Signalübertragung vermittelt und für Axonführung, synaptische Plastizität sowie die Ausbildung von Gewebegrenzen wichtig ist. Nach Bindung von Ephrin-Liganden löst EphA4 eine bidirektionale Signalgebung aus, die über Signalwege mit Rho-Familien-GTPasen, MAPK-Kaskaden und PI3K-assoziierter Signalübertragung das Zytoskelett-Remodeling, Zelladhäsion und Migration moduliert. In der Humanbiologie wird eine veränderte EphA4-Signalgebung mit gestörter neuronaler Verschaltung und fehlregulierten Programmen der Zellmotilität in neuroentwicklungs- und neurodegenerativen Kontexten in Verbindung gebracht, ebenso wie mit invasionsassoziierten Phänotypen in Krebsmodellen. Diese Eigenschaften machen EPHA4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Cross-Talk zwischen Rezeptor-Tyrosinkinasen, ligandenabhängiger Signaldynamik und Mechanismen der Zell-Zell-Kommunikation.
EphA4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHA4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.