EphA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400729-NIC

EPHA4 codifica EphA4, un recettore tirosin-chinasico della famiglia Eph/ephrin che media una segnalazione dipendente dal contatto, importante per la guida assonale, la plasticità sinaptica e la formazione dei confini tissutali. In seguito al legame con ligandi efrina, EphA4 innesca una segnalazione bidirezionale che modula il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione cellulare e la migrazione attraverso vie che coinvolgono le GTPasi della famiglia Rho, le cascate MAPK e la segnalazione associata a PI3K. Nella biologia umana, un’alterazione della segnalazione di EphA4 è stata associata a una connettività neuronale disregolata e a programmi aberranti di motilità cellulare rilevanti in contesti neuroevolutivi e neurodegenerativi, oltre che a fenotipi associati all’invasione in modelli di cancro. Queste caratteristiche rendono EPHA4 un nodo utile per studiare il cross-talk tra recettori tirosin-chinasici, le dinamiche di segnalazione dipendenti dal ligando e i meccanismi di comunicazione cellula-cellula.

EphA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHA4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.