Plasmide CRISPR/Cas9 KO EPC2 (h): sc-407068

Présentation

EPC2 (enhancer of polycomb homolog 2) code une protéine associée à la chromatine qui agit comme un composant des réseaux régulateurs du groupe Polycomb, contribuant au contrôle épigénétique de la transcription. EPC2 participe à des complexes multiprotéiques qui influencent l’état des modifications des histones et l’accessibilité de la chromatine, façonnant ainsi des programmes gouvernant l’identité cellulaire, la prolifération et la différenciation. Par ces mécanismes, EPC2 relie le remodelage de la chromatine aux dynamiques de répression/activation transcriptionnelle sur des loci régulés au cours du développement. Une altération de la régulation épigénétique dépendante d’EPC2 a été étudiée dans le contexte de signatures d’expression génique dérégulées observées dans le cancer et d’autres troubles impliquant un contrôle anormal de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EPC2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène EPC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du EPC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert EPC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EPC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en EPC2 pour l'étude de la signalisation de EPC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de EPC2 essentiels à la fonction de EPC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de EPC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EPC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le EPC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus EPC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EPC2 plasmide HDR (h) et le EPC2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie EPC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles EPC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.