Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (h): sc-400647-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EPAS-1/HIF-2 alpha Double-Nickase-Plasmid (h) und EPAS-1/HIF-2 alpha Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPAS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EPAS-1/HIF-2 alpha: sc-13596
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (h) | sc-400647-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EPAS-1/HIF-2 alpha Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400647-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPAS1 kodiert EPAS-1/HIF-2α, einen sauerstoffsensitiven bHLH-PAS-Transkriptionsfaktor, der mit ARNT (HIF-1β) ein Heterodimer bildet, um die hypoxieadaptive Genexpression zu koordinieren. Bei niedrigem Sauerstoff entgeht EPAS-1/HIF-2α dem durch Prolylhydroxylasen und VHL vermittelten Abbau, akkumuliert im Zellkern und aktiviert Programme, die Angiogenese, Erythropoese, Eisenstoffwechsel und metabolische Umprogrammierung steuern. Die EPAS1-Signalgebung überschneidet sich mit PI3K–AKT–mTOR- und MAPK-Signalwegen und trägt zu Zellschicksalsentscheidungen in Endothel- und anderen sauerstoffsensitiven Geweben bei. Eine fehlregulierte EPAS1-Aktivität und veränderte Hypoxiesignalgebung werden mit Tumorbiologie und vaskulärem Remodeling in Verbindung gebracht, und EPAS1-Varianten wurden mit Störungen der Sauerstoffsensorik assoziiert.
EPAS-1/HIF-2 alpha Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPAS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPAS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPAS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPAS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.