Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401807

概要

RAPGEF3は、Epac（cAMPによって直接活性化される交換因子）をコードしており、cAMPシグナルをRap1およびRap2といった低分子GTPアーゼの活性化へと結び付けるグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）です。Epacは、PKA、MAPK、インテグリンのシグナル伝達ネットワークと交差するcAMP依存性経路を介して、細胞接着、内皮バリアの制御、分泌、カルシウム依存性応答などの過程における細胞内シグナル伝達を調節します。ヒト細胞では、RAPGEF3/Epac活性が血管系および免疫細胞の機能に影響を与え、代謝調節、炎症シグナル、腫瘍関連の細胞遊走表現型といった文脈で研究されています。RAPGEF3依存性のcAMP–Rapシグナルを解析することで、セカンドメッセンジャーの動態が細胞骨格の再構築や区画化されたシグナル伝達複合体の形成をどのように規定するかを明らかにする助けとなります。

Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRAPGEF3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RAPGEF3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RAPGEF3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Epacタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Epacシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RAPGEF3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Epacの機能に不可欠なRAPGEF3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RAPGEF3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Epac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEpac CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RAPGEF3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Epac HDRプラスミド（h）および Epac HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRAPGEF3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRAPGEF3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。