Particules Lentivirales d'Activation (h) Ep-CAM: sc-400220-LAC

EPCAM code la molécule d’adhérence épithéliale (Ep-CAM), une glycoprotéine transmembranaire enrichie aux contacts cellule–cellule des épithéliums, qui contribue à l’architecture tissulaire, à la polarité et à une prolifération régulée. Au-delà de l’adhérence, Ep-CAM participe à des programmes de signalisation qui recoupent le contrôle transcriptionnel associé à la β-caténine et l’état de différenciation épithéliale, influençant l’organisation des jonctions et l’expression génique en aval. Une expression altérée d’EPCAM est fréquemment observée dans la biologie des tumeurs épithéliales et la progression métastatique, et EPCAM est également impliqué dans l’intégrité de la barrière épithéliale et des phénotypes de type « stem ». Ces propriétés font d’EPCAM un nœud génétique utile pour étudier l’identité épithéliale, le tri cellulaire et les réseaux transcriptionnels liés à la transformation.

Les particules d'activation lentivirales Ep-CAM (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EPCAM dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Ep-CAM (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EPCAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Ep-CAM. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EPCAM ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.