Plasmide Double Nickase (h) Ep-CAM: sc-400220-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Ep-CAM correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ep-CAM Double Nickase (h) et le plasmide Ep-CAM Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPCAM. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ep-CAM Antibody (C-10): sc-25308
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Ep-CAM | sc-400220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Ep-CAM | sc-400220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPCAM code pour la molécule d’adhérence des cellules épithéliales (Ep-CAM), une glycoprotéine transmembranaire enrichie aux jonctions épithéliales, qui favorise l’adhérence homotypique cellule–cellule et le maintien de l’architecture épithéliale. Au-delà de l’adhérence, Ep-CAM participe à la régulation de la prolifération et de la différenciation via des programmes de signalisation qui interfèrent avec l’activité de Wnt/β-caténine ainsi qu’avec des processus associés à la transition épithélio-mésenchymateuse. Une expression d’EPCAM altérée et des variations génétiques sont liées à la biologie des tumeurs épithéliales, en influençant l’adhérence cellulaire, la migration et l’organisation tissulaire dans de multiples contextes carcinomateux. EPCAM est aussi largement utilisé comme marqueur moléculaire de la lignée épithéliale et dans la recherche sur les cellules tumorales circulantes, permettant d’étudier l’identité épithéliale et la plasticité.
Ep-CAM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPCAM dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPCAM. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPCAM. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPCAM.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.