EOMES CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403485-ACT

EOMES (Eomesodermin) ist ein T-Box-Transkriptionsfaktor, der während der Entwicklung und im Immunsystem die Festlegung von Zelllinien (lineage commitment) und Differenzierungsprogramme koordiniert. In menschlichen T- und NK-Zellen integriert EOMES Zytokin- und TCR-assoziierte Signale, um transkriptionelle Netzwerke zu regulieren, die die zytotoxische Effektorfunktion, die Gedächtnisdifferenzierung und interferon-γ‑gekoppelte Antworten steuern. Seine Aktivität überschneidet sich mit umfassenderen genregulatorischen Schaltkreisen, die Entscheidungen über das Zellschicksal prägen, einschließlich Chromatin-Remodeling und der Nutzung transkriptioneller Enhancer. Eine fehlregulierte EOMES-Expression wurde mit veränderten Immunzellzuständen in Verbindung gebracht und in Kontexten wie Tumorimmunologie, chronischen Infektionen und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen untersucht.

EOMES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EOMES-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EOMES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EOMES-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EOMES-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EOMES-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EOMES-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EOMES-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EOMES-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EOMES-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.