Enterokinase HC Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403764-ACT

TMPRSS15 codifica a enteroquinase, uma protease de serina transmembranar do tipo II expressa na borda em escova do intestino delgado proximal, onde inicia cascatas proteolíticas digestivas ao converter o tripsinogênio em tripsina. Essa etapa de ativação amplifica o processamento subsequente de múltiplos zimógenos pancreáticos, ligando o TMPRSS15 à sinalização por proteases e à digestão luminal de proteínas. Alterações na atividade da enteroquinase estão associadas à absorção prejudicada de proteínas e à disfunção intestinal, e o gene é usado como marcador de diferenciação de enterócitos e de maturação epitelial. Como a ativação de proteases influencia o processamento de nutrientes e a homeostase da mucosa, o TMPRSS15 é relevante para estudos de fisiologia gastrointestinal e biologia da barreira epitelial.

Enterokinase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMPRSS15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Enterokinase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMPRSS15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMPRSS15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Enterokinase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMPRSS15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Enterokinase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Enterokinase em células tumorais com expressão de TMPRSS15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.