Plasmide CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m): sc-419988
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ENT2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ENT2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ENT2 Antibody (D-9): sc-373871
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m) | sc-419988 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Slc29a2 code le transporteur nucléosidique équilibratif 2 (ENT2), un transporteur de la membrane plasmique largement exprimé qui assure un flux bidirectionnel, dépendant du gradient de concentration, de nucléosides puriques et pyrimidiques tels que l’adénosine et l’inosine. ENT2 contribue à réguler les voies de sauvetage des nucléosides, les pools intracellulaires de nucléotides et l’homéostasie de l’adénosine extracellulaire, influençant ainsi la synthèse d’ADN/ARN, l’énergétique cellulaire et la signalisation purinergique. Dans les systèmes murins, une activité ENT2 altérée est pertinente pour l’étude des réponses au stress métabolique, de la signalisation immunitaire et inflammatoire gouvernée par la disponibilité des nucléosides, ainsi que de la modulation, via les transporteurs, de l’entrée de médicaments et d’analogues nucléosidiques. Slc29a2 est donc fréquemment étudié dans des contextes reliant le transport des nucléosides à la prolifération, à la différenciation et à l’homéostasie tissulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc29a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc29a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc29a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ENT2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc29a2 pour l'étude de la signalisation de ENT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Slc29a2 essentiels à la fonction de ENT2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc29a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ENT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ENT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc29a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ENT2 plasmide HDR (m) et le ENT2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc29a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc29a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.