Plásmido Doble Nickase (h) Endothelin-2/EDN2/ET-2: sc-403871-NIC

EDN2 codifica la endotelina-2 (ET-2), un péptido vasoactivo secretado de la familia de las endotelinas que señaliza principalmente a través de los receptores de endotelina ETA (EDNRA) y ETB (EDNRB) para regular la contracción del músculo liso, el tono vascular y la comunicación paracrina. ET-2 activa vías de señalización acopladas a proteínas G que modulan el flujo de calcio intracelular, las cascadas de PKC/MAPK y programas transcripcionales posteriores que afectan la proliferación, la migración y la remodelación de la matriz extracelular. La expresión de EDN2 está estrechamente regulada en tejidos reproductivos y durante la hipoxia y la inflamación, lo que la vincula con procesos como la ruptura folicular asociada a la ovulación, las respuestas angiogénicas y el reclutamiento de células inmunitarias. La desregulación de la señalización de endotelina se ha implicado en el remodelado cardiovascular, fenotipos fibróticos y cambios en el microambiente asociado a tumores, lo que convierte a EDN2 en un nodo útil para estudios mecanísticos de vías impulsadas por GPCR.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EDN2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EDN2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EDN2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EDN2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.