Endothelin-2/EDN2/ET-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403871-ACT

EDN2 kodiert Endothelin-2 (ET-2), ein stark vasoaktives Peptid, das aus einem Präpropeptid prozessiert wird und vor allem über Endothelinrezeptoren (EDNRA/EDNRB) wirkt, um die Kontraktion glatter Muskulatur, endotheliale Signalübertragung und die parakrine Kontrolle der Gewebeperfusion zu regulieren. Die ET-2-Signalübertragung aktiviert G‑Protein‑gekoppelte Signalwege, die intrazelluläres Calcium sowie MAPK/ERK- und PLC/PKC-Kaskaden modulieren und dadurch Proliferation, Migration und die Produktion inflammatorischer Mediatoren beeinflussen. Über die Gefäßbiologie hinaus ist EDN2 an reproduktiven Prozessen und der Dynamik ovarieller Follikel, an hypoxieabhängigen Transkriptionsprogrammen sowie an stromalem Remodeling beteiligt. Eine fehlregulierte Aktivität der Endothelin-Achse, einschließlich veränderter EDN2-Expression, wurde mit fibrotischen Prozessen, pulmonaler und kardiovaskulärer Pathophysiologie sowie mit Signalprozessen im Tumormikromilieu in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie relevant sind.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EDN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EDN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EDN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Endothelin-2/EDN2/ET-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EDN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Endothelin-2/EDN2/ET-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Endothelin-2/EDN2/ET-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EDN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.