Plásmido Doble Nickase (h) Endothelin-1/EDN1/ET-1: sc-400564-NIC

EDN1 codifica la endotelina-1 (ET-1), un potente péptido vasoactivo secretado, producido por células endoteliales y otros tipos celulares, que regula el tono vascular, la contracción del músculo liso y las respuestas mitogénicas. ET-1 señaliza principalmente a través de los receptores de endotelina (EDNRA/EDNRB) para activar vías acopladas a proteína G, incluidas PLCβ–IP3/Ca²⁺, PKC, MAPK/ERK y RhoA/ROCK, modulando la vasorreactividad, la inflamación y la remodelación de la matriz extracelular. La expresión y la señalización desreguladas de EDN1 se estudian en contextos de disfunción endotelial, respuestas a la hipoxia y programas de remodelación fibrótica e hipertrófica. La actividad alterada del eje ET-1 se ha implicado en la fisiopatología cardiopulmonar y renal, y se examina con frecuencia como mediador de la inflamación vascular y la remodelación tisular en modelos relevantes de enfermedad.

Endothelin-1/EDN1/ET-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EDN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EDN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EDN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EDN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.