Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Endophilin II Double Nickase Plasmid (h): sc-401620-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Endophilin II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Endophilin II Double-Nickase-Plasmid (h) und Endophilin II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SH3GL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Endophilin II: sc-365704
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Endophilin II Double Nickase Plasmid (h) | sc-401620-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Endophilin II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401620-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SH3GL1 kodiert Endophilin II, ein SH3-Domäne-haltiges Adapterprotein, das die Wahrnehmung von Membrankrümmung mit der Endozytose koppelt, indem es während der clathrinvermittelten Vesikelbildung prolinreiche Partner und lipidgebundene Module einbindet. Endophilin II ist am Recycling synaptischer Vesikel und an der Internalisierung von Rezeptoren beteiligt und verknüpft Membrantransportprozesse mit Aktin-Remodelling sowie Signaloutputs von Wachstumsfaktor- und Immunrezeptoren. Aufgrund seiner Rolle in der Dynamik endozytischer Wege und in Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken wurde SH3GL1 in Zusammenhängen untersucht, in denen Vesikeltransport die Zellproliferation, Differenzierung und Stressantworten beeinflusst. Eine veränderte Regulation von SH3GL1 oder Fusionsereignisse wurden mit für hämatologische Malignome relevanten Signal- und Trafficking-Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien in der Krebsbiologie und der Funktion von Immunzellen macht.
Endophilin II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SH3GL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SH3GL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SH3GL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SH3GL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.