ENDOG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420176

Übersicht

Endog kodiert die Endonuklease G (ENDOG), eine mitochondriale Nuklease, die am Stoffwechsel der mitochondrialen DNA sowie am kontrollierten Abbau von Nukleinsäuren unter zellulärem Stress beteiligt ist. ENDOG wirkt in Signalwegen mit, die mit apoptoseähnlicher DNA-Fragmentierung, der Aufrechterhaltung des mitochondrialen Genoms und einer umfassenderen mitochondrialen Homöostase verknüpft sind, welche die oxidative Phosphorylierung und die Signalgebung über reaktive Sauerstoffspezies beeinflussen kann. Eine veränderte ENDOG-Aktivität wurde mit einer dysregulierten mitochondrialen Funktion und Genomintegrität in Verbindung gebracht – Prozesse, die in Modellen der Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion und inflammatorischem Stress relevant sind. In Mausmodellen stellt Endog einen gut untersuchbaren Knotenpunkt dar, um die Kommunikation von den Mitochondrien zum Zellkern sowie stressabhängige Entscheidungen über das Zellschicksal zu analysieren.

Das ENDOG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Endog-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Endog-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Endog nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ENDOG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Endog-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ENDOG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Endog-Exone abzielen, die für die ENDOG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Endog-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ENDOG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ENDOG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Endog-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ENDOG HDR-Plasmid (m) und ENDOG HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Endog-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Endog-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.