endobrevin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403438

Übersicht

VAMP8 kodiert Endobrevin, ein vesikelassoziiertes SNARE-Protein, das Membranfusionsereignisse vermittelt, die für die regulierte Exozytose und den endozytotischen Transportweg zentral sind. Es ist an der Assemblierung von SNARE-Komplexen mit Partner-Syntaxinen und SNAP-Proteinen beteiligt, um Vesikel-Andocken und -Fusion anzutreiben, und unterstützt dabei Prozesse wie Granulasekretion, Phagosom–Lysosom-Fusion sowie den Transport zu späten Endosomen/Lysosomen. In immunologischen und epithelialen Kontexten beeinflusst die VAMP8-abhängige Vesikeldynamik inflammasombezogene Sekretion und Funktionen der mukosalen Barriere, wodurch eine Fehlregulation mit entzündlichen Phänotypen und veränderten Wirt–Pathogen-Antworten verknüpft ist. Störungen von Endobrevin können zudem das Rezeptor-Recycling und degradative Wege umgestalten, was es für Studien zur Abschwächung von Signalübertragung, Antigenprozessierung und zellulären Stressantworten relevant macht.

Das endobrevin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VAMP8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VAMP8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VAMP8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die endobrevin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VAMP8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der endobrevin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VAMP8-Exone abzielen, die für die endobrevin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VAMP8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom endobrevin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom endobrevin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VAMP8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das endobrevin HDR-Plasmid (h) und endobrevin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VAMP8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VAMP8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.