endobrevin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403438

Descripción general

VAMP8 codifica endobrevina, una SNARE asociada a vesículas que media eventos de fusión de membranas fundamentales para la exocitosis regulada y el tráfico endocítico. Participa en el ensamblaje del complejo SNARE con sintaxinas asociadas y proteínas SNAP para impulsar el acoplamiento y la fusión de vesículas, apoyando procesos como la secreción de gránulos, la fusión fagosoma–lisosoma y el transporte hacia endosomas tardíos/lisosomas. En contextos inmunitarios y epiteliales, la dinámica vesicular dependiente de VAMP8 influye en la secreción relacionada con el inflamasoma y en las funciones de la barrera mucosa, vinculando su desregulación con fenotipos inflamatorios y respuestas alteradas frente a patógenos. La alteración de la endobrevina también puede remodelar el reciclaje de receptores y las vías degradativas, por lo que resulta relevante para estudios de atenuación de la señalización, procesamiento de antígenos y respuestas al estrés celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO endobrevin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VAMP8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VAMP8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VAMP8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína endobrevin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VAMP8 para la investigación de la señalización de endobrevin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VAMP8 críticos para la función de endobrevin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VAMP8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido endobrevin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido endobrevin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VAMP8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR endobrevin (h) y el plásmido HDR endobrevin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VAMP8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VAMP8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.