Plásmido CRISPR de Activación (h) endobrevin: sc-403438-ACT

El gen humano **VAMP8** codifica **endobrevina**, una SNARE asociada a vesículas que media eventos de fusión de membranas necesarios para el tráfico endosomal, la exocitosis regulada y la secreción de gránulos. La endobrevina participa en el ensamblaje del complejo SNARE con socios de la membrana plasmática para controlar el acoplamiento y la fusión de vesículas en células inmunitarias, plaquetas y compartimentos epiteliales, influyendo en procesos como la desgranulación, la liberación de citocinas y la secreción de mucina. A través de estas funciones, **VAMP8** afecta vías de transporte vesicular que modulan la señalización inflamatoria, la hemostasia y la defensa del huésped. En la literatura, la desregulación del tráfico dependiente de **VAMP8** se ha relacionado con alteraciones de la función secretora y fenotipos inflamatorios, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos sobre la fusión vesicular y la biología de enfermedades asociadas a la secreción.

endobrevin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VAMP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

endobrevin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VAMP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VAMP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de endobrevin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VAMP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de endobrevin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía endobrevin en células tumorales con expresión de VAMP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.