Endo180 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403483

Übersicht

MRC2 kodiert Endo180 (auch als uPARAP bekannt), einen transmembranären endozytotischen Rezeptor aus der Mannoserezeptor-Familie, der Kollagen bindet und zur lysosomalen Degradation internalisiert. Endo180 verknüpft die Umgestaltung der extrazellulären Matrix mit Zelladhäsion und -migration, indem es den Kollagenumsatz, integrinassoziierte Signalübertragung sowie endozytosegekoppelte Trafficking-Wege reguliert. Über seine Rolle bei der Kollagenaufnahme und Matrixdynamik trägt Endo180 zu stromaler Umstrukturierung und invasiven Zellphänotypen bei, wie sie häufig in der Krebsbiologie, bei Fibrose und im Kontext der Gewebereparatur untersucht werden. Eine Fehlregulation der MRC2/Endo180-Aktivität wurde mit einer veränderten Homöostase der extrazellulären Matrix und mit mikroumgebungsbedingten Veränderungen in Verbindung gebracht, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.

Das Endo180 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MRC2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MRC2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MRC2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Endo180-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MRC2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Endo180-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MRC2-Exone abzielen, die für die Endo180-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MRC2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Endo180 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Endo180 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MRC2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Endo180 HDR-Plasmid (h) und Endo180 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MRC2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MRC2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.