ENC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406167

Übersicht

ENC1 (ectodermal-neural cortex 1) kodiert ein Aktin-bindendes Protein aus der Kelch-Repeat-Familie, das Umbauprozesse des Zytoskeletts mit Programmen der zellulären Differenzierung verknüpft. In menschlichen Zellen wurde ENC1 mit der Regulation der Aktin-Dynamik, mit oxidativen Stressantworten sowie mit einer kontextabhängigen Kontrolle von Proliferation und neuronalen Linienmerkmalen in Verbindung gebracht, was Rollen in Entwicklung und Aufrechterhaltung des Zellzustands stützt. Eine veränderte ENC1-Expression wurde in mehreren Tumorarten sowie in neurobiologischen Modellen beschrieben, was ENC1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen macht, die Redox-Signale, Zytoskelett-Organisation und transkriptionelle Outputs koppeln. Diese Eigenschaften machen ENC1 zu einem Forschungsziel für mechanistische Studien zu Differenzierung, Stressanpassung und krebsassoziierten Phänotypen.

Das ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ENC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ENC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ENC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ENC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ENC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ENC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ENC1-Exone abzielen, die für die ENC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ENC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ENC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ENC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ENC1 HDR-Plasmid (h) und ENC1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ENC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ENC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.