ENA-78 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405834

Übersicht

CXCL5 kodiert das epitheliale neutrophilenaktivierende Peptid 78 (ENA-78), ein CXC-Chemokin, das von Epithel- und Stromazellen sezerniert wird und über die CXCR2-Signalübertragung die Chemotaxis und Aktivierung von Neutrophilen steuert. ENA-78 trägt zur Rekrutierung entzündlicher Zellen, zur Modulation des Endothelverhaltens und zur Koordination von Gewebereaktionen über Signalwege bei, die mit MAPK- und NF-κB-regulierten Transkriptionsprogrammen verknüpft sind. Eine dysregulierte CXCL5-Expression wurde in verschiedenen Gewebekontexten mit chronisch entzündlichen Mikroumgebungen, fehlgeleitetem Leukozyten-Trafficking und tumorassoziierter Entzündung in Verbindung gebracht. Als Mediator angeborener Immunsignale wird CXCL5 häufig in Modellen der mukosalen Entzündung, der Wundreaktion und des Crosstalks von Zytokinnetzwerken untersucht.

Das ENA-78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CXCL5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CXCL5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CXCL5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ENA-78-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CXCL5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ENA-78-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CXCL5-Exone abzielen, die für die ENA-78-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CXCL5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ENA-78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ENA-78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CXCL5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ENA-78 HDR-Plasmid (h) und ENA-78 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CXCL5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CXCL5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.