EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420172

Übersicht

Engrailed 2 (EN2) ist ein Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Musterbildung im sich entwickelnden Mittelhirn–Hinterhirn-Bereich unterstützt und die neuronale Differenzierung, die Axonführung sowie Programme der regionalen Identität im zentralen Nervensystem der Maus reguliert. Durch die Bindung an DNA über seine Homöodomäne koordiniert EN2 Transkriptionsnetzwerke, die nachgeschaltet zu Morphogengradienten wie FGF- und WNT-Signalen wirken und die Entwicklung von Kleinhirn und Tectum formen. Eine veränderte EN2-Dosierung oder regulatorische Kontrolle wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und Verhaltensmerkmalen in Verbindung gebracht, was EN2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise im Gehirn macht. EN2 wird außerdem als Marker und mechanistischer Einstiegspunkt genutzt, um die transkriptionelle Kontrolle des Schicksals neuraler Vorläuferzellen und der Schaltkreisbildung zu untersuchen.

Das EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des En2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des En2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von En2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EN2/Engrailed 2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von En2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EN2/Engrailed 2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf En2-Exone abzielen, die für die EN2/Engrailed 2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere En2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom EN2/Engrailed 2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des En2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EN2/Engrailed 2 HDR-Plasmid (m) und EN2/Engrailed 2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von En2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten En2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.