EMP-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407036

Panoramica

EMP3 codifica la proteina di membrana epiteliale 3 (EMP-3), una proteina di membrana simile alle tetraspanine, implicata nella regolazione dell’adesione cellulare, dell’organizzazione della membrana e della trasduzione del segnale sulla superficie cellulare. Nelle cellule umane, EMP-3 è stata collegata alla modulazione di vie coinvolte nella proliferazione e nelle risposte allo stress, incluse la segnalazione associata ai recettori e i componenti a valle delle reti MAPK/PI3K, a seconda del contesto cellulare. Alterazioni dei pattern di espressione di EMP3 sono state riportate in molteplici tipi di tumore e in studi relativi a patologie neurologiche, a supporto del suo impiego come variabile molecolare in modelli di segnalazione oncogenica, invasione e differenziamento. In quanto fattore associato alla membrana, EMP-3 è inoltre rilevante per analizzare i cambiamenti nelle interazioni cellula–cellula e nelle risposte al microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EMP-3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EMP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EMP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EMP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EMP-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EMP3 per lo studio della segnalazione di EMP-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EMP3 critici per la funzione di EMP-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EMP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EMP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EMP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EMP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EMP-3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EMP-3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EMP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EMP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.