Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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emerin Double Nickase Plasmid (h): sc-401048-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das emerin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- emerin Double-Nickase-Plasmid (h) und emerin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EMD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: emerin: sc-25284
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
emerin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401048-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
emerin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401048-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EMD kodiert Emerin, ein Protein der inneren Kernmembran, das an Lamina-Proteine (Lamins) und LEM-Domänen-Partner bindet, um die Kernlamina zu organisieren und Chromatin mit der Kernperipherie zu verbinden. Emerin ist über den LINC-Komplex an der Kopplung zwischen Zellkern und Zytoskelett beteiligt, reguliert die Mechanotransduktion und beeinflusst Transkriptionsprogramme, die an der Muskeldifferenzierung und der Kontrolle des Zellzyklus beteiligt sind. Störungen der emerinabhängigen Kernarchitektur werden mit veränderter Genomstabilität, aberranter Signalübertragung und Änderungen der Zellmechanik in Verbindung gebracht. Varianten in EMD sind mit der X‑chromosomalen Emery‑Dreifuss-Muskeldystrophie und verwandten Laminopathie-Phänotypen assoziiert und machen den Lokus zu einem nützlichen Modell für die Untersuchung der Biologie der Kernhülle und der stressabhängigen Genregulation.
emerin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EMD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EMD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EMD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EMD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.