emerin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401048-ACT

Das humane **EMD**-Gen kodiert Emerin, ein LEM-Domänenprotein der inneren Kernmembran, das die Kernlamina verankert und den Zellkern über Interaktionen mit Laminen, BAF und LINC-assoziierten Komponenten an zytoskelettäre Kräfte koppelt. Emerin trägt zur Organisation der Kernhülle, zur Mechanotransduktion und zur Verankerung von Chromatin bei und beeinflusst dadurch die Transkriptionsregulation, DNA-Schadensantworten und den Ablauf des Zellzyklus. Störungen der emerinabhängigen Kernarchitektur werden mit gewebespezifischen Pathologien in quergestreifter Muskulatur und im kardialen Reizleitungssystem in Verbindung gebracht, wodurch **EMD** ein häufig verwendetes Modellsystem für die Biologie kernhüllenassoziierter Erkrankungen ist. Als Gerüstprotein an der Kernperipherie wird Emerin oft in Signalwegen untersucht, die die Steifigkeit des Zellkerns, die Genomstabilität und differenzierungsabhängige Genexpressionsprogramme steuern.

emerin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EMD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

emerin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EMD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EMD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen emerin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EMD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von emerin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des emerin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EMD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.