Elk-1 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400385-LAC-2

Das humane Gen ELK1 kodiert den ETS-Familien-Transkriptionsfaktor Elk-1, ein nukleäres Substrat der ERK1/2-, JNK- und p38-MAPK-Signalwege, das nachgeschaltet von Wachstumsfaktor- und Stresssignalen phosphoryliert wird, um die Transkription von Immediate-Early-Genen anzustoßen. Elk-1 bildet häufig mit dem Serum Response Factor an Serum-Response-Elementen Komplexe, um Programme zu regulieren, die den Eintritt in den Zellzyklus, die Differenzierung, aktivitätsabhängige Transkription in Neuronen und adaptive Antworten auf extrazelluläre Reize steuern. Eine dysregulierte ELK1/Elk-1-Aktivität wurde mit einer onkogenen MAPK-Signalweg-Ausgabe sowie mit für Neurodegeneration und vaskuläre Pathologie relevanten Mechanismen in Verbindung gebracht, vermittelt über veränderte Transkriptionsnetzwerke. Eine auf ELK1 ausgerichtete Geneditierung ermöglicht die funktionelle Untersuchung MAPK-reaktiver Transkription, die Kartierung der Elk-1-Bindung und ihrer Kofaktorabhängigkeiten sowie die Etablierung von Reporter- oder Perturbationsmodellen zur Erforschung der Signal-zu-Gen-Kopplung in humanen Zellen.

Elk-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ELK1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Elk-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ELK1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Elk-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ELK1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.