elastin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400640-ACT

Das humane Gen **ELN** kodiert **Elastin**, ein stark quervernetztes Protein der extrazellulären Matrix, das Geweben wie Arterienwänden, Lunge und Haut Elastizität und Rückstellkraft verleiht. Elastin wird als **Tropoelastin** abgelagert und auf **mikrofibrillären Gerüsten** assembliert, wodurch die Organisation der Matrix mit dem Verhalten glatter Muskelzellen, der Mechanotransduktion und Signalwegen des Umbaus der extrazellulären Matrix gekoppelt wird. Die **ELN-Expression** und die Integrität von Elastinfasern beeinflussen die Gefäßcompliance und die Homöostase des Bindegewebes und stellen damit eine Verbindung zwischen veränderter Elastogenese und erblichen sowie erworbenen Erkrankungen her, die durch arterielle Stenosen, eine erhöhte Aneurysma-Anfälligkeit und dermale Schlaffheit gekennzeichnet sind. Als Matrixbestandteil mit langer Halbwertszeit wird Elastin häufig in Modellen der Entwicklung, des Alterns und fibrosisassoziierter Veränderungen der Gewebebiomechanik untersucht.

elastin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ELN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

elastin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ELN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ELN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen elastin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ELN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von elastin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des elastin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ELN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.