Elastase-3A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403529-ACT

CELA3A kodiert Elastase‑3A, eine sekretierte, chymotrypsinähnliche Serinprotease, die hauptsächlich von pankreatischen Azinuszellen gebildet und als Verdauungsenzym in das Duodenum abgegeben wird, wo sie an der Proteolyse von Nahrungsproteinen beteiligt ist. Als Bestandteil des Enzymnetzwerks des exokrinen Pankreas trägt Elastase‑3A zu der regulierten Zymogensynthese, -sekretion und zu luminalen Aktivierungskaskaden bei, die die Nährstoffverarbeitung und die gastrointestinale Homöostase unterstützen. Veränderungen in der Expression pankreatischer Serinproteasen, einschließlich Mitgliedern der Elastasefamilie, werden in Studien zu Stressantworten von Azinuszellen, inflammatorischer Signalgebung und Remodeling des Pankreasgewebes häufig untersucht. CELA3A ist daher relevant für mechanistische Forschung zur Biologie des exokrinen Pankreas und zu krankheitsassoziierten Veränderungen in Programmen der Verdauungsenzym-Expression.

Elastase-3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CELA3A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Elastase-3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CELA3A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CELA3A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Elastase-3A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CELA3A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Elastase-3A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Elastase-3A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CELA3A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.