eIF4AII CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402758-ACT

EIF4A2 kodiert eIF4AII, eine DEAD-Box-RNA-Helikase, die als zentraler Bestandteil des eIF4F-Translationsinitiationskomplexes fungiert. Durch das Auflösen von Sekundärstrukturen in 5′-UTRs und die Koordination des mRNA-Loadings auf Ribosomen unterstützt eIF4AII die cap-abhängige Translation und beeinflusst die Proteomzusammensetzung als Reaktion auf zelluläre Wachstums- und Stresssignale. Seine Aktivität ist mit Signalwegen verknüpft, die Proteinsynthese, RNA-Metabolismus und stressadaptive translationale Reprogrammierung steuern – Prozesse, die in proliferations- und stressassoziierter Krankheitsbiologie häufig gestört sind. Eine veränderte Translationskontrolle durch Mitglieder der eIF4A-Familie wird genutzt, um zu untersuchen, wie dysregulierte mRNA-Translation zu onkogenen Signalwegen, Neurobiologie und Virus-Wirt-Interaktionen beiträgt, ohne dabei klinische Ergebnisse zu implizieren.

eIF4AII Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EIF4A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

eIF4AII Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EIF4A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EIF4A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen eIF4AII-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EIF4A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von eIF4AII-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des eIF4AII-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EIF4A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.