Plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AI (m): sc-420146

Présentation

Eif4a1 code l’hélicase ARN DEAD-box eIF4AI chez la souris, un composant central de la machinerie d’initiation de la traduction eIF4F qui déroule les 5′ UTR structurées afin de permettre le balayage par le ribosome et la reconnaissance du codon d’initiation. En remodelant de manière dépendante de l’ATP la structure secondaire des ARNm, eIF4AI soutient la traduction dépendante de la coiffe et influence la protéostasie, l’adaptation au stress et la progression du cycle cellulaire. Son activité s’intègre au contrôle de la synthèse protéique régulé par mTOR et peut façonner des programmes de traduction sélectifs affectant la croissance, le métabolisme et la différenciation. Des modifications de la dynamique d’initiation de la traduction impliquant les hélicases de la famille eIF4A ont été associées à des signalisations oncogéniques, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une dérégulation des réponses au stress, faisant d’Eif4a1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle traductionnel.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF4AI (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif4a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif4a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif4a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eIF4AI.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif4a1 pour l'étude de la signalisation de eIF4AI, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Eif4a1 essentiels à la fonction de eIF4AI
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif4a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eIF4AI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le eIF4AI plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif4a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eIF4AI plasmide HDR (m) et le eIF4AI (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif4a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif4a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.