eIF2A Double Nickaseプラスミド (m): sc-432849-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- eIF2A Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- eIF2Aダブルニカースプラスミド（m）およびeIF2Aダブルニカースプラスミド（m2）は、Eif2aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: eIF2A 抗体 (3A7A8): sc-517214
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
eIF2A Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2A Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-432849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのEif2aは、翻訳開始の代替因子であるeIF2Aをコードしており、正規のeIF2活性が制限される条件下で、開始メチオニンtRNA（Met-tRNAi）をリボソームへ供給するのを支えます。eIF2Aは細胞ストレス時の翻訳制御に寄与し、統合的ストレス応答（ISR）シグナル伝達や、プロテオスタシスを再構築するのに役立つ選択的翻訳プログラムと交差します。栄養制限、ERストレス、その他の攪乱時に細胞がどのようにタンパク質合成を開始するかを形作ることで、Eif2aは生存、分化、適応を司る経路に影響を与えます。翻訳開始の破綻やストレス応答性タンパク質合成の異常は、神経変性、代謝機能障害、がん生物学に広く関係しているため、Eif2aはストレスと連動した遺伝子発現の機構研究において有用な結節点となります。
eIF2A ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Eif2a 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Eif2a内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Eif2aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Eif2aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。