eIF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423216

Panoramica

Il gene murino **Eif1** codifica il fattore eucariotico di inizio della traduzione 1 (eIF1), un componente conservato del complesso di pre-inizio 43S che favorisce una corretta selezione del codone di inizio durante l’avvio della traduzione dipendente dal cap. Imponendo rigore allo scanning e stabilizzando una conformazione aperta della subunità 40S, eIF1 contribuisce a controllare la sintesi proteica globale e la fedeltà del proteoma. Questa funzione collega **Eif1** a programmi di controllo della traduzione che modellano crescita cellulare, adattamento allo stress e differenziamento attraverso un’iniziazione selettiva su specifici mRNA. L’alterazione della fedeltà dell’inizio della traduzione è ampiamente rilevante per stati patologici caratterizzati da omeostasi proteica compromessa e segnalazione di crescita aberrante, rendendo **Eif1** un nodo utile per studi meccanicistici della disregolazione traduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif1 per lo studio della segnalazione di eIF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Eif1 critici per la funzione di eIF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal eIF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal eIF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal eIF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR eIF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.