eIF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423216

Übersicht

Das murine Gen **Eif1** kodiert den eukaryotischen Translationsinitiationsfaktor 1 (eIF1), eine konservierte Komponente des 43S-Präinitiationskomplexes, die während der cap-abhängigen Translationsinitiation eine präzise Auswahl des Startcodons fördert. Indem eIF1 die Stringenz des Scannings durchsetzt und eine offene Konformation der 40S-Untereinheit stabilisiert, trägt es zur Kontrolle der globalen Proteinsynthese und zur Integrität des Proteoms bei. Diese Funktion verknüpft **Eif1** mit Programmen der translationalen Kontrolle, die über mRNA-selektive Initiation Zellwachstum, Stressanpassung und Differenzierung prägen. Eine Störung der Genauigkeit der Translationsinitiation ist für krankheitsassoziierte Zustände mit veränderter Proteostase und aberranter Wachstumssignalgebung breit relevant, wodurch **Eif1** ein geeigneter Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur translationalen Fehlregulation ist.

Das eIF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eif1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eif1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eif1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die eIF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eif1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der eIF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Eif1-Exone abzielen, die für die eIF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eif1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom eIF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom eIF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eif1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das eIF1 HDR-Plasmid (m) und eIF1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eif1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eif1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.