EHMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402460

Übersicht

EHMT1 (euchromatische Histon-Lysin-Methyltransferase 1) kodiert eine Methyltransferase mit SET-Domäne, die vor allem die Mono- und Dimethylierung von Histon H3 an Lysin 9 (H3K9me1/2) katalysiert und dadurch die Transkriptionsrepression innerhalb des Euchromatins fördert. Als Bestandteil epigenetischer Regulationskomplexe mit Partnern wie EHMT2/G9a trägt EHMT1 dazu bei, die Chromatinzugänglichkeit zu formen, linienspezifische Genexpressionsprogramme zu koordinieren und während Entwicklung und Differenzierung die zelluläre Identität zu stabilisieren. Die EHMT1-abhängige H3K9-Methylierung steht in Wechselwirkung mit der DNA-Methylierung und der Organisation des Heterochromatins und beeinflusst so die Genomstabilität sowie die Genregulation über große Distanzen. Eine Fehlregulation der EHMT1-Aktivität oder -Dosierung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter neuronaler Genexpression in Verbindung gebracht und wird u. a. im Kontext synaptischer Funktion, kognitionsrelevanter Signalwege und chromatinassoziierter Krankheitsmechanismen untersucht.

Das EHMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EHMT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EHMT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EHMT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EHMT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EHMT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EHMT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EHMT1-Exone abzielen, die für die EHMT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EHMT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EHMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EHMT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EHMT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EHMT1 HDR-Plasmid (h) und EHMT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EHMT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EHMT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.