EGFR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400015-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EGFRO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase EGFR (h) e o Plasmídeo Double Nickase EGFR (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EGFR. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EGFR Anticorpo (A-10): sc-373746
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EGFR Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400015-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EGFR Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400015-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O recetor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) é uma tirosina quinase de recetor que regula a proliferação, a sobrevivência, a diferenciação e a migração celulares por meio da dimerização induzida por ligando e da autofosforilação. O EGFR ativado propaga a sinalização através de vias principais, incluindo RAS–RAF–MEK–ERK (MAPK), PI3K–AKT–mTOR, PLCγ–PKC e JAK–STAT, integrando sinais extracelulares com programas transcricionais e metabólicos. Na biologia humana, a sinalização desregulada do EGFR, por sobre-expressão, amplificação ou mutações ativadoras, é frequentemente associada a fenótipos oncogénicos e a uma responsividade alterada a estímulos de fatores de crescimento. O EGFR também participa na homeostase do tecido epitelial e na reparação de feridas, tornando-se um nó central para o estudo da dinâmica de sinalização de recetores, do tráfego intracelular e do crosstalk entre vias.
EGFR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EGFR em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EGFR. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EGFR. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EGFR interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.