EGFL11 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406815

Übersicht

EYS kodiert EGFL11, ein großes extrazellulärmatrix-assoziiertes Protein, das in Photorezeptorzellen angereichert ist und dort zur strukturellen Integrität sowie zur Aufrechterhaltung des äußeren Segments der Retina beiträgt. EGFL11 enthält multiple EGF-ähnliche Domänen, was mit Funktionen in Protein-Protein-Interaktionen, extrazellulärer Gerüstbildung und der Organisation des periziliären Umfelds vereinbar ist, das den ziliären Transport und die Homöostase der Phototransduktion unterstützt. Störungen von EYS sind stark mit erblichen retinalen Degenerationen verbunden, einschließlich autosomal-rezessiver Retinitis pigmentosa und verwandter Phänotypen, die durch eine progressive Funktionsstörung der Photorezeptoren gekennzeichnet sind. Daher wird EYS/EGFL11 häufig in Zusammenhang mit Signalwegen untersucht, die den ziliumassoziierten Transport, die Organisation der Extrazellulärmatrix und Stressantworten in Retinazellen steuern.

Das EGFL11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EYS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EYS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EYS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EGFL11-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EYS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EGFL11-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EYS-Exone abzielen, die für die EGFL11-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EYS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EGFL11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EGFL11 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EYS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EGFL11 HDR-Plasmid (h) und EGFL11 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EYS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EYS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.