EGFL11 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-406815

개요

EYS는 광수용체 세포에 풍부하게 존재하며 망막 외절(retinal outer segment)의 구조적 완전성과 유지에 기여하는, 큰 세포외기질(ECM) 연관 단백질인 EGFL11을 암호화합니다. EGFL11은 여러 개의 EGF-유사 도메인을 포함하고 있어 단백질–단백질 상호작용, 세포외 스캐폴딩, 그리고 섬모 수송(ciliary trafficking)과 광변환(phototransduction) 항상성을 지지하는 섬모 주변(periciliary) 환경의 조직화에 관여하는 역할과 부합합니다. EYS의 기능 이상은 상염색체 열성 망막색소변성증을 비롯한 유전성 망막 퇴행과 강하게 연관되며, 진행성 광수용체 기능 장애를 특징으로 하는 관련 표현형들을 유발합니다. 그 결과 EYS/EGFL11은 망막 세포에서 섬모 연관 수송, 세포외기질 조직화, 스트레스 반응을 조절하는 경로에서 자주 연구됩니다.

EGFL11 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 EYS 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 EYS 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 EYS의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 EGFL11 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 EGFL11 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 EYS 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• EGFL11 기능에 중요한 EYS 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 EYS 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• EGFL11 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 EGFL11 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 EYS 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  EGFL11 HDR 플라스미드 (h) 및 EGFL11 HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 EYS 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 EYS 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.