Plásmido Doble Nickase (m) EFR3A: sc-429403-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EFR3A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EFR3A (m) y el plásmido de doble nickasa EFR3A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Efr3a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EFR3A | sc-429403-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EFR3A | sc-429403-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Efr3a** codifica **EFR3A**, un andamiaje conservado asociado a la membrana plasmática que ayuda a reclutar la actividad de la fosfatidilinositol 4‑quinasa a la superficie celular, manteniendo la homeostasis de los fosfoinosítidos y la señalización aguas abajo. Al regular PI4P y otros reservorios relacionados de fosfoinosítidos, EFR3A influye en el tráfico de membranas, la señalización de receptores y procesos dependientes de actina que determinan la polaridad celular y la adhesión. Esta vía es clave para el control dinámico de la identidad de membrana y de las redes de señalización dependientes de fosfoinosítidos utilizadas ampliamente en los tejidos, incluido el sistema nervioso. La alteración del metabolismo de los fosfoinosítidos se ha implicado en múltiples trastornos, por lo que **Efr3a** constituye un objetivo útil para estudios mecanísticos de señalización de membrana y organización celular en modelos murinos.
EFR3A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Efr3a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Efr3a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Efr3a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Efr3a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.