EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401163

Übersicht

Das humane Gen **EEF2** kodiert den Elongationsfaktor 2 (EF‑2), eine zentrale Komponente des Translations‑Elongationszyklus, der die Translokation des Ribosoms auf der mRNA antreibt und die globale Proteinsynthese aufrechterhält. Die EF‑2‑Aktivität ist über eine durch **EF2K** vermittelte Phosphorylierung eng an Nährstoff‑ und Stresssignale gekoppelt und überschneidet sich mit der durch **mTOR** regulierten Translationskontrolle, wodurch Ribosomendynamik mit zellulärem Wachstum und metabolischer Anpassung verknüpft wird. Störungen von **EEF2** beeinflussen die Proteostase, den Zellzyklusfortschritt und Stressantworten; eine veränderte Regulation von EF‑2 wurde in unterschiedlichen Kontexten berichtet, die mit dysregulierter Proliferation und Neurobiologie zusammenhängen. Als zentraler Knotenpunkt der Translationskontrolle wird **EEF2** routinemäßig in Signalwegen untersucht, die die Ribosomenfunktion, integrierte Stresssignalgebung und selektive Translation unter Stress steuern.

Das EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EEF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EEF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EEF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die EF-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EEF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der EF-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EEF2-Exone abzielen, die für die EF-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EEF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom EF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EEF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das EF-2 HDR-Plasmid (h) und EF-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EEF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EEF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.